ELISA試劑盒檢測(cè)中用到的樣品處理方法
瀏覽次數(shù)：6871發(fā)布日期：2013-08-21
hbzhan內(nèi)容導(dǎo)讀：試劑盒使用時(shí)一定要根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要購(gòu)買提取試劑盒，如果不是試劑盒，或許能提出RNA，但不能確保其質(zhì)量以及完整性，會(huì)影響RT-PCR、Northernblot、Dotblot、RealtimeRTPCR、芯片分析、polyA篩選、體外翻譯、RNase保護(hù)分析、分子克隆等后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
1.細(xì)胞培養(yǎng)物上清：
細(xì)胞培養(yǎng)物于室溫1000g，離心10分鐘后收集上清，并將標(biāo)本保存于-20℃，且應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.血清：
標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后與1000g，4℃離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.血漿：
可用EDTA或肝素作為抗凝劑標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃，1000g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4.尿液：
無(wú)菌收集取初尿，離心除去沉淀物，既可用于檢測(cè)，要長(zhǎng)期保存尿樣，可以加入0.05%的NaN3在4-8℃保存，或加入尿樣冰凍保護(hù)液放入-20℃冰箱長(zhǎng)期保存。
5.組織勻漿：
將組織標(biāo)本先用PBS洗滌，除去多余血液，勻漿化后放在PBS于-20℃放置過夜，再經(jīng)過二次反復(fù)凍融破膜，5000g,4℃離心5分鐘，取上清即可檢測(cè)。
當(dāng)前提取效果好的是QIANGEN公司生產(chǎn)的RNA提取
試劑盒，但其售價(jià)較高，單次實(shí)驗(yàn)費(fèi)用話費(fèi)太大，對(duì)精度要求不高的實(shí)驗(yàn)沒有必要購(gòu)買，當(dāng)然還有其它的進(jìn)口試劑盒，但是均存在價(jià)格高、訂貨周期長(zhǎng)的問題（如果碰上國(guó)內(nèi)無(wú)貨的時(shí)候，要從國(guó)外發(fā)貨，會(huì)等很長(zhǎng)一段時(shí)間）。普通的提取實(shí)驗(yàn)用國(guó)產(chǎn)的試劑盒就足以，價(jià)格不高，基本上各地均有現(xiàn)貨，如天根（目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的試劑盒中銷售面比較廣的一種）等，其價(jià)格比進(jìn)口試劑盒要便宜許多，且效果還不錯(cuò)，性價(jià)比還可以。
當(dāng)然，就RNA的提取而言，不一定
試劑盒的提取效果就非常好，其實(shí)采用一些經(jīng)典的RNA提取方法，效果也很不錯(cuò)，如：TRIZOL、EDTA等，只是試劑盒使用方便，經(jīng)典的方法操作復(fù)雜一些。
